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CRISPR/cas9 基因編輯技術(shù)

日期:2021-08-16瀏覽:2498次

        CRISPR/Cas系統(tǒng)是原核生物的一種天然免疫系統(tǒng),存在于大多數(shù)細(xì)菌和古生菌中。原核生物在遭到病毒入侵后,能夠把病毒DNA的一小段提取出來(lái)并存儲(chǔ)到自身基因組上的特定區(qū)域, 我們把這個(gè)區(qū)域稱為CRISPR存儲(chǔ)空間。當(dāng)再次遇到病毒入侵時(shí),原核生物能夠根據(jù)存儲(chǔ)的DNA片段識(shí)別病毒,將病毒的DNA切斷而使之失效。目前應(yīng)用*泛的CRISPR/Cas系統(tǒng)是來(lái)源于釀膿鏈球菌 (Streptococcus pyogenes) 的CRISPR/Cas9系統(tǒng)。


       天然的CRISPR-Cas9系統(tǒng)由三部分組成:SpCas9 (以下簡(jiǎn)稱Cas9)、crRNA、tracrRNA。為了方便實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以及提高gRNA的穩(wěn)定性,Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier將crRNA和tracrRNA融合成一條RNA,并把其稱為sgRNA (single-guide RNA),見(jiàn)下圖。

       改造后的CRISPR/Cas9系統(tǒng)成為研究者做基因編輯的有利工具。Cas9蛋白要成功識(shí)別目標(biāo)序列必須滿足兩個(gè)條件:(1) sgRNA的5'端20 nt和靶DNA之間堿基配對(duì);(2) 靶DNA的3'端有合適的PAM序列。CRISPR/Cas9切割目標(biāo)DNA后產(chǎn)生DSB (雙鏈斷裂),DSB是一切基于核酸內(nèi)切酶的基因編輯的基礎(chǔ),CRISPR/Cas9因?yàn)橹恍枰淖僺gRNA的5'端序列即可重編程Cas9的序列特異性,設(shè)計(jì)和操作十分方便。


CRISPR-Cas9技術(shù)優(yōu)勢(shì)

  1. 效率高:可精確編輯基因組,編輯效率高

  2. 周期短:構(gòu)建和使用極為方便,極大降低了實(shí)驗(yàn)難度,縮短實(shí)驗(yàn)周期

  3. 廣譜性:無(wú)基因、細(xì)胞及物種限制

  4. 多重編輯能力:可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行基因打靶

  5. 功能豐富:可實(shí)現(xiàn)敲除、插入、抑制、激活等多種目的基因



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